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血细胞正常值, “隐匿”的血细胞

作者:   来源:  热度:8  时间:2021-05-27






作者 | 蔡圆珺审校 | 周延杰单位 | 江阴市人民医院检验科前 言血常规是一项常规检验项目,广泛应用于临床疾病诊疗及预防保健的各个环节。随着技术的进步,自动化的血细

作者 | 蔡圆珺

审校 | 周延杰

单位 | 江阴市人民医院检验科

前  言

血常规是一项常规检验项目,广泛应用于临床疾病诊疗及预防保健的各个环节。随着技术的进步,自动化的血细胞分析流水线优化了我们的工作流程,节约了人力资源,协助我们完成了“不可能完成”的工作量。

然而,总有那么一些细胞,善于“伪装”和“隐藏”,骗过我们的仪器,使仪器呈现出虚假的结果,对此我们要擦亮眼睛,仔细甄别,去伪存真。今天我们为大家分享几个近期工作中遇到的典型案例。

病例1

患者女性,55岁,多关节肿痛40余年,因疼痛无缓解割伤左腕急诊入院。既往有高血压、支气管扩张、双肺结节病史及白内障手术史。仪器检测结果WBC:9.71,IG:33.6%,提示核左移,未成熟粒细胞存在,触发推片复检规则(图1)。

图1

在低倍镜浏览全片的时候我们发现血片的边缘有细胞聚集的现象(图2),油镜下看到聚集的细胞为各阶段的中性粒细胞,未成熟的中性粒细胞占比较高,存在核左移的现象(图3)。

图2

图3

我们第一时间联系了临床,建议加抽枸橼酸钠抗凝管和肝素抗凝管复查血常规,排除抗凝剂因素引起的白细胞聚集。可能由于护理单元交接班出现疏漏,第二天送检的仅有肝素抗凝管。检测结果显示白细胞计数较之前升高(图4),但镜下仍存在白细胞聚集的现象(图5-6),最终我们通过计数板手工计数的方式报告了白细胞计数结果。

图4

图5

图6

通过查阅文献我们了解到,外周血白细胞聚集较少见,细胞聚集类型可分为中性粒细胞聚集、淋巴细胞聚集、白细胞聚集、白细胞血小板聚集。

目前认为白细胞聚集主要与以下两种因素有关:(1)抗凝剂因素:EDTA依赖的白细胞聚集;(2)温度因素:血清中存在温度依赖的抗体。

白细胞聚集现象易被忽视,引起仪器对白细胞计数结果假性偏低,可能导致临床误诊和错误治疗。

推片复检可以发现白细胞聚集情况,另外,电阻抗法血细胞分析仪中的NMV(中性粒细胞平均体积)、NDW(中性粒细胞体积分布宽度)这两个参数明显增高也可提示白细胞聚集的情况存在。

当发现白细胞聚集时我们可以尝试用下列途径纠正:(1)更换抗凝剂重新采血复查;(2)37℃水浴后立即检测;(3)手工计数及分类。

病例2

患者男性,74岁,因反复头晕不适半月余入院。既往有冠心病、房颤、高血压病史。

仪器检查结果显示血小板计数仅为23×109/L,已低至危急值,且存在血小板聚集的报警,该结果触发了推片复检规则(图7)。

图7

镜下我们看到血片体尾交界处所见符合血小板减少的情况(图8),但是当视野移动至血片边缘和片尾处时,可见淡蓝色云雾状的团块出现(图9)。

图8

图9

在油镜下能隐约看到血小板缠绕于淡蓝色纤维蛋白丝之间(图10-11),怀疑存在血小板聚集,于是我们将此情况告知临床,请护士重新采血复查。

图10

图11

临床护士使用EDTA抗凝管重采了一管标本送检,此时我们测得血小板计数结果为81×109/L,证实了之前团块中有较多聚集的血小板。

回顾该标本的分析过程,我们认为第一次采血室很有可能是由于采血不顺导致血小板被激活,并聚集成团,缠绕在纤维蛋白丝之间。

由于激活后释放了颗粒物质或者患者自身因素,导致我们看到的血小板颗粒很少,容易被忽略,这也提醒我们今后看到纤维蛋白团块的时候要留意血小板计数是否存在偏差。

病例3

患者男性,68岁,突发呕血、黑便,入住我院此,此前诊断为肝右叶巨块性肝癌,肝硬化,十二指肠球部溃疡,结肠息肉,右肺结节,双肾萎缩,双肾结石。血常规检测结果显示,红细胞计数显著降低,MCV升高,MCH、MCHC显著升高,并且存在红细胞凝集的报警,触发了推片复检规则(图12)。

图12

在显微镜下我们看到了明显的红细胞聚集现象(图13-14),于是我们将标本进行37℃水浴20分钟处理,将处理完的标本立即上机检测并推片染色,结果显示红细胞参数趋于正常,红细胞聚集的报警未再出现(图15),镜下可见红细胞基本散开(图16-17)。

图13

图14

图15

图16

图17

红细胞凝集在临床工作中较为常见,引起红细胞凝集的原因有很多,如冷凝集素,自身抗体,低白蛋白血症等。为排除红细胞凝集对血常规检验的影响。

常用的纠正方法主要有以下几种:(1)37℃水浴后立即检测;(2)血浆置换法(可能导致血小板假性减低);(3)预稀释模式检测(可能导致血小板假性增高);(4)利用仪器的网织红通道复测红细胞参数。

小结

血常规虽然是一项最普通的检查,真正要做好却也不易。一份合格的血常规报告的发出离不开科学的报告审核程序、扎实的形态学功底及科学严谨的工作态度。

对于异常病例检验科应当于临床进行充分有效的沟通,并在实验室内部建立追踪随访机制。同时,我们的检验人员还应善于结合理论知识、病史资料、其他检验检查结果来综合分析研判,尽可能找到问题的根源,给临床一个合理的解释。

【参考文献】

[1]白志瑶,包艳,耿娅萍,尹春琼.EDTA-K2抗凝外周血白细胞聚集3例[J].检验医学与临床,2020,17(20):3069-3071.

[2]贾相燕,朱丽萍,马晓波,李庆.显微镜复检在血小板假性减低中的应用研究[J].实验与检验医学,2017,35(4):510-512.

[3]窦心灵,樊玉兰,柴凤霞,柴丽,许丽.冷凝集现象对血常规多项参数检测结果的干扰及处理对策[J].国际检验医学杂志,2016,37(4):562-563.

END

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编辑:徐少卿   审校:陈雪礼

“浙江生物和你只差一个指尖的距离”

一、目的要求

1.了解血细胞计数板的构造和使用方法。

2.学会用血细胞计数板对酵母细胞进行计数。

二、基本原理

利用血细胞计数板在显微镜下直接计数,是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液(或孢子悬液)放在血细胞计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中,在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的(0.1或0.4mm2),所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和,故又称为总菌计数法。适用于稀释的菌悬液(或孢子悬液),即液体培养基中菌体的计数,但不可以计细菌数量

优点:直观、快速。

血细胞计数板,通常是一块特制的载玻片,其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半,每一边的平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分九个大方格,中间的大方格即为计数室,微生物的计数就在计数室中进行。

计数室的刻度一般有两种规格,一种是一个大方格分成16个中方格,而每个中方格又分成25个小方格;另一种是一个大方格分成25个中方格,而每个中方格又分成16个小方格。但无论是哪种规格的计数板,每一个大方格中的小方格数都是相同的,即16×25=400小方格。

  

?       血细胞计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器

?       计数时,常采用样方法

每一个大方格边长为1或2mm,则每一大方格的面积为1或4mm2,盖上盖玻片后,载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm,所以计数室的容积为0.1或0.4mm3

在计数时,通常数四或五个中方格的总菌数,然后求得每个中方格的平均值,再乘上1625,就得出一个大方格中的总菌数,然后再换算成1ml菌液中的总菌数。

下面以一个大方格0.1mm325个中方格的计数板为例进行计算:设五个中方格中总菌数为A,菌液稀释倍数为B,那么,一个大方格中的总菌数1ml=1cm3=1000mm3

同理,如果是16个中方格的计数板,设五个中方格的总菌数为A',则

三、器材

酿酒酵母菌悬液,血细胞计数板,显微镜,盖玻片,无菌毛细管。

 

四、操作步骤

1.稀释

将酿酒酵母菌悬液进行适当稀释,菌液如不浓,可不必稀释。

2.镜检计数室

在加样前,先对计数板的计数室进行镜检。若有污物,则需清洗后才能进行计数。

3.加样品

将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片,再用无菌的细口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴(不宜过多),让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室,一般计数室均能充满菌液。(此处浙科版课本P73有误)注意不可有气泡产生。

4.显微镜计数

静止5分钟后,将血细胞计数板置于显微镜载物台上,先用低倍镜找到计数室所在位置,然后换成高倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀,需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内约有510个菌体为宜。每个计数室选4或5个中格中的菌体进行计数。

镜检计数方法:①方格内细胞的计数顺序为左上→右上→右下→左下。②压在方格线上的细胞只计左线和上线上的细胞数。③酵母细胞若有粘连, 要数出团块中的每一个细胞。④出芽酵母的芽体体积若超过细胞体积的1/2,则算独立个体。⑤计数总数不少于300个细胞。

5.清洗血细胞计数板

使用完毕后,将血细胞计数板在水笼头上用水柱冲洗,切勿用硬物洗刷,洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检,观察每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不干净,则必须重复洗涤至干净为止。

6.注意事项

(1)进行计数前,应先将试管摇匀,目的是使酵母菌在培养液中混合均匀,以减少计数误差。

(2)显微镜计数时,对于压在小方格界线上的酵母菌,应取相邻两边及顶角计数。

(3)若一个小方格内酵母菌数量过多,难以数清时,则可将培养液稀释一定倍数后再计数。

(4)本实验无另设对照实验,酵母菌每天的数量变化可形成前后对照。

(5)血细胞计数板使用后,切勿用硬物洗刷,可采用浸泡和冲洗的方法清洗。

五、实验报告

将结果记录于下表中。 A表示五个中方格中的总菌数; B表示菌液稀释倍数。

六、例题

1 :在用血细胞计数板(2mm×2mm方格)对某一稀释50倍样品进行计数时,发现在一个计数室内(盖玻片下的培养液厚度为0.1mm)酵母菌平均数为16,据此估算10mL培养液中有酵母菌               个。2x107

 

2:酵母菌的计数通常用血细胞计数板进行,血细胞计数板每个大方格容积为0.1mm3,由400个小方格组成。现对某一样液进行检测,如果一个小方格内酵母菌过多,难以计数,应先         后再计数。若多次重复计数后,算得每个小方格中平均有5个酵母菌,则10mL该培养液中酵母菌总数有              个。稀释 2×108

检测员将1 mL水样稀释10倍后,用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量;将盖玻片放在计数室上,用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室,并用滤纸吸去多余液体。已知每个计数室由25×16400个小格组成,容纳液体的总体积为0.1 mm3

现观察到图中该计数室所示abcde 5个中格80个小格内共有蓝藻n个,则上述水样中约有蓝藻                    个/mL(5n×105)

例4 为监测酵母的活细胞密度,将发酵液稀释1000倍后,经等体积台盼蓝染液染色,用25×16型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数,理论上      色细胞的个数应不少于      ,才能达到每毫升3×109个活细胞的预期密度。(无  30)

据说99%的人     因为关注我们都考上了理想的大学

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前  言

血细胞分析仪的普及,大大地提高了我们的工作效率。而外周血细胞形态的重视、分析,是我们品赏甘饴的视觉食粮。

白细胞的中毒颗粒,红细胞的形态改变,血小板的真假聚集,永远是我们津津乐道的话题。

血细胞数量的多寡佐以形态的缀述,才能使检验内容更丰富、检验结果更可信、检验步骤更规范。

血涂片镜检是指血液经推片、染色后,在光学显微镜下进行的血细胞分类,红细胞、白细胞、血小板形态观察以及寄生虫检查等,是血液形态学检查的基本方法[1]。尤其是部分血液病的诊断,通常会将外周血细胞异常作为重要的评判依据[2]

案例经过

工作中遇到血细胞分析仪异常的报警图谱,是经常的。

白细胞总数的明显增高,中性粒细胞百分率的明显增高,幼稚细胞的显现,贫血的呈现,脂血的影响,iRBC(受感染的红细胞)的满格,众多的信息充斥着画面。

同时用0.9%的生理盐水置换血浆作二次上机。

血色素更低了,这却是患者的真实成绩。iRBC依然红警彰显,患者的红细胞难道被疟原虫感染?因近年随国际间交流的不断扩大,国际交往及劳务输出人员日益增加,由此带来输入性疟疾病例呈逐年增加的态势[3]

为验证机器的警示,作了进一步的测试,使用疟原虫快速检测试剂盒作筛查。然而检测区(T)并未如质控区(C)一样出现红色反应线。

 

经与临床联系,患者男性,49岁,无海外留居史,因背部脓肿引发脓毒血症病危,此血样是患者毕生最后的样本。

案例分析

涂片、染色、镜检;低倍、高倍、油镜。熟练的动作,熟悉的工作流程。

这是一例脓毒血症患者临终前一小时的血样样片。

小细胞低色素的基础上伴有部分红细胞肿胀、破裂、异形改变,发生溶血。仔细搜索,百视野观察,也未找到类似疟原虫的迹象,Q-FlagiRBC 300的异常报警值,原因不明。

全片几近所有的白细胞呈肿胀性改变,体积增大,空泡滋长,胞浆洒逸,胞膜破损,一片衰败残象,如同秋风飒飒中自然凋落的树叶或经历暴风雨洗劫后缤纷的落英。

正常的细胞有细胞膜包裹着,能够保持相对的稳定,维持正常的生命活动。细胞所必需的养分吸收,代谢产物的排出,都要通过完整的细胞膜来完成。如果细胞丧失了这种功能,细胞就会走向死亡。

而此例脓毒症患者的细胞形态发生了诸多异常变化。

心  得

患者体内历经炎症风暴因子的洗劫,其血细胞无法承受内外环境的压力改变,而出现形态学方面的膨胀或破裂,如若这种异常现象超出了机体的代偿能力,也许是间接在宣告一个生命的摇曳坠落。

[参考文献]

[1]叶应妩,王毓,申子瑜.全国临床检验操作规程(第三版)[M].南京,东南大学出版社,2006.

[2]于书春.外周血细胞计数与形态学检查对常见白血病诊断的作用[J].临床检验杂志(电子版),2017,6(2):308-309.

[3]刘起勇,刘小波.媒介按蚊防控:中国疟疾消除的关键措施[J].中国媒介生物学及控制杂志.2010,21(05):409-413.

END

说明:本文为原创投稿,不代表检验医学新媒体观点。转载时请注明来源及原创作者姓名和单位。

编辑:徐少卿   审校:陈雪礼

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